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Este debate contiene 1 respuesta, tiene 2 mensajes y lo actualizó Tutor CEIFER Biobanco 8 Marzo, 2017 at 09:53.
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- 31 Mayo, 2011 a las 16:08 #2072
por Alumno CEIFER Formación.
Hola a todos
El tema de análisis de semen postvasectomía parece que no está claro en el manual.
Hay que pensar que esa parte del manual no ha sido diseñada para un estudio en particular, sino que da las herramientas que luego podemos aplicar.
Pero estamos en un curso de análisis de semen y podemos intentar llegar a un protocolo de estudio de muestras postvasectómicas por "concenso de expertos".
En un documento que parece ha propuesto la SEQC y que he conocido a través de nuestra compañera de curso Carmen Blanco dice lo que recojo más abajo.
¿que opináis?
Saludos
PROCEDIMIENTO VASECTOMÍA
Diluir la muestra 1:1 con diluyente de Weigman, por ejemplo 100 µl + 100 µl. Se prepararán dos alícuotas de la misma muestra.
La dilución se hará con diluyente Weigman: 50 g NaHCO 3, 10 ml solución de formaldehído al 36-40% (solución de formaldehído saturada). Se disuelven los constituyentes en agua destilada hasta completar 1000 ml. Después hay que filtrarlo para eliminar cristales en un bote limpio y se debe conservar a 4º C (puede ser almacenado hasta 12 meses). Este diluyente no debe contener partículas sólidas, si es así se desechará y se preparará otro.
En la cámara de recuento de Neubauer improved, el cubreobjetos debe ir adherido con agua y con sus pinzas de sujeción. Deben verse varias líneas irisadas (>10 anillos de Newton) en la superficie del cristal donde se apoya el cubreobjetos que nos indicarán que la profundidad de la cámara es la correcta. Si se observan pocas líneas, la profundidad de la cámara estará aumentada, el volumen de la cámara será mayor y el resultado de la evaluación será incorrecto.
El tubo que contiene la muestra diluida debe mezclarse en el agitador vortex al menos 10 segundos inmediatamente antes de rellenar la cámara. La dilución preparada se cargará en la cámara con una pipeta de 10 µl teniendo cuidado de rellenarla correctamente sin dejar ningún menisco al final de la retícula. Empleamos un hemocitómetro de Neubauer improved por muestra y cargamos cada dilución en una de las cámaras del hemocitómetro, tiene dos. Inmediatamente se colocará la cámara de Neubauer improved en una cámara húmeda (por ejemplo, una placa de Petri con papel de filtro humedecido con agua destilada) para que los espermatozoides sedimenten en la cuadrícula durante 10 o 15 minutos.
Contamos las 9 cuadrículas de cada cámara del hemocitómetro con la óptica de 20x del microscopio de contraste de fases.
Si observamos espermatozoides, tenemos que observar 40 µl de la muestra de semen sin diluir, bien homogeneizada con una pipeta Pasteur, al microscopio en porta con cubre grande 24×50, campo a campo par ver si los espermatozoides tienen movilidad. La movilidad se informará de manera cualitativa.
- 8 Marzo, 2017 a las 09:53 #2106
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Yolanda Host… – miércoles, 1 de junio de 2011, 20:10
Hola a todos:
Yo creo que debido al poco tiempo que tenemos por la cantidad de trabajo diario y tambien que por mi experiencia normalmente no encuentro mas que 1 o 2 espermatozoides en porta contando 40 campos y ademas inmoviles, deberiamos observar la muestra en porta y si encontramos suficientes espermatozoides como para hacer dilucion y cuantificarlos bien, pero sino informar directamente de esta forma.Si encuentras espermatozoides y ademas son moviles adelantas trabajo y tiempo de la muestra que este en danza pasando la hora adecuada para verla
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Carmen Blanc… – sábado, 11 de junio de 2011, 20:27
Hola a todos,
Yo retomo el tema del análisis del semen post-vasectomía y agradezco al tutor que lo saque en este curso porque si no, cada uno lo va a hacer como mejor le parece.
Yo no sé vosotros, pero en mi laboratorio las muestra post-vasectomía suponen un 40% del trabajo diario y hay que hacerlas bien para que luego no nos llevemos sustos( embarazos) inesperados.
Respecto a este protocolo, no me parece lógico que el primer paso sea ya diluir la muestra y ver si hay o no spz en la cámara de neubauer. Nunca lo hems hecho así.
Yo haría lo siguiente:
1) Ver el fresco y estudiar si hay o no hay spz y de paso dar su movilidad(%).
Pero aquí viene la primera duda ¿es realmente necesario 1200 campos? porque si os fijais en la figura 2.9 pág 47 del manual, el epígrafe que viene encima de la figura dice: esto implica valorar 1200 campos……….para un cubre de 24×50, y aproximadamente 484 campos ………….para un cubre de 22×22., Luego no sé sí es que se les ha colado o es que permiten esta segunda alternativa.
Esto es importante porque yo creo que 484 campos son suficientes y es un buen equilibrio entre cantidad de campos y tiempo empleado.
2) Si hay spz, diluimos la muestra 1:1 y contamos, y aplicamos los límites de sensibilidad de la cámara en función del nº spz que contemos. A veces son pocos spz pero a veces son muchos.
3) si no hay spz, nos quedan 2 opciones
a) pedir una segunda muestra al cabo de 20 días.
b) centrifugar y estudiar el pellet.
Segunda duda ¿cuál hacemos?
Tercera duda ¿centrifugamos toda la muestra o solo 1 ml como para el estudio de azoospermia?
A ver qué os parece y espero que este protocolo sea corregido todo lo necesario.
Otra cosa,
Sabemos que si los spz están inmóviles y hay menos de 10000 spz/ml después de 7 meses y 24 eyaculaciones se le da de alta al paciente (British Andrology Society), pero ¿cuál es el límite si vemos spz móviles?
Saludos,
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Tutor CEIFER… – jueves, 16 de junio de 2011, 16:33
Hola a todos
Tendré que contestar yo de nuevo, ya que nadie se anima….
……lo he pensado mejor y no lo voy a hacer.
A ver, opinad sobre lo que plantea Carmen.
¿Que haríais si encontrais spz móviles?
Saludos
Re: Análisis de semen postvasectomía
de María Paz P… – jueves, 16 de junio de 2011, 21:22
Hola a todos,
Me gustaría, como a tí Carmen, y ya que el tutor nos anima a ello, quedara el tema postvasectomías claro.
¿ Por qué no diluir primero la muestra al 1/2 ? Si no encontramos Spz en el total de las dos cámaras, aunque no podemos poner 0 Spz , no habría que montar los 40 uL y ver 1200 campos( ó en el mejor de los casos 480 campos ) para ver si hay Spz móviles, ya que ” no se observan en la muestra evaluada…”
Si los hay, si que habría que mirar movilidad pero siendo pocos ¿ no valdría con “se observan ó no se observan Spz móviles”? Ya que si encontremos un móvil ya requiere un seguimiento y el % llevaría un error considerable.
Si la centrifugación no asegura que queden en el pellet ,como estamos viendo en el curso, ¿para que centrifugar?
Y puestos a que salga un protocolo, dos preguntas:
¿Primer control postvasectomía a los 4, 6, ó 7 meses tras intervención? ¿Sólo un control? ¿ Dos controles con un mes entre ellos?
¿Criterios de alta.?
Saludos
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Carmen Blanc… – viernes, 17 de junio de 2011, 16:47
Hola Mª Luisa
Efectivamente, el protocolo que nos ha puesto el tutor para discutir y que tú muy bien resumes podría ser válido, pero supondría un cambio radical en el protocolo que hasta ahora veníamos haciendo para las muestras post-vasectomía. Por eso, hay que estar seguros de cuál es el mejor protocolo, y espero que en esto nos ayude el tutor.
Respecto a lo que preguntas sobre el control postvasectomía, está en el curso: Tema 4.5.diapositivas 7 y 8.
Hay que hacer el 1º control: tras 24 eyaculaciones tras la vasectomía, lo ideal tras 4 meses.
Hay que hacer un 2º control a las 2-4 semanas del 1º, y
si se viesen spz, mandar otro control a los 7 meses.
Si después de 7 meses post-vasectomía hay <10.000 spz/ml inmóviles se puede dar el alta.
Lo que yo preguntaba en este curso es si hay un límite inferior de spz móviles con los que se podría dar de alta porque esto yo no lo he encontrado en la bibliografía, por si alguien lo sabe.
Saludos,
Buen fin de semana.
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Carmen Blanc… – viernes, 17 de junio de 2011, 17:25
Perdón,
Quería responder a Mª Paz.
Saludos.
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Tutor CEIFER… – sábado, 18 de junio de 2011, 07:31
Hola a todos
Creo que lo mejor es recabar información sobre el curso sobre vasectomias (no se exactamente como se llamó)……….
……….Ya la tengo
En breve os daré información y quizás encontremos una explicación a los cambios de esos criterios que habla Carmen, así como periodos de alta, etc.
Me consta además que se está intentando un documento de consenso.
Por lo demás, mi opinión particular es que no se debe dar el alta ante el encuentro de espermatozoides móviles.
Saludos
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Tutor CEIFER… – sábado, 18 de junio de 2011, 08:30
Hola a todos
Lo primero informaros que saldrá un documento de consenso que nos puede aclarar todas las dudas. Os pongo un resumen de la información que me ha llegado, porque me parece muy interesante. Podéis ver en ella que el “rumor” que circulo sobre la técnica era infundado.
Espero que esto aclare las dudas
Tiempo de espera hasta el seminograma
Se considera que un período de 3 a 4 meses es capaz de detectar los fallos técnicos
La eliminación de los espermatozoides almacenados distalmente al lugar de la vasectomía requiere un número de eyaculaciones que, para la mayoría de expertos, debe ser entre 15 y 25 por lo menos.
Número de seminogramas necesarios
El criterio de éxito de la intervención de vasectomía se basa en la ausencia de espermatozoides en dos análisis de semen consecutivos, separados entre ellos por un período de un mes. Estudios recientes sugieren que un solo seminograma puede ser suficiente para comprobar la eficacia de la vasectomía, si la concentración de espermatozoides es menor de 0.1 millones/mL, todos ellos inmóviles.
Métodos de análisis
Se recomienda realizar el análisis siguiendo los métodos propuestos por el manual de la OMS en su 5ª edición
Examen microscópico inicial
Se aplican 40 µL de semen sin diluir en un portaobjetos atemperado a 37ºC bajo un cubreobjetos de 24 x 50 mm. ……
Determinación de la concentración espermática
Si se quiere determinar con mayor precisión la concentración espermática es preferible usar alguno estos métodos
Se realizará una dilución 1:1 (v:v) del semen con un diluyente apropiado, y se hará un recuento por duplicado en la totalidad de la retícula de una cámara de “Neubauer improved”……….
Se puede aumentar la precisión del análisis usando cámaras Leja® , tinción con fluorocromo (Hoeschst 33342) y un microscopio de fluorescencia.
¿Es necesario esperar hasta la azoospermia?
La evidencia actual sugiere que menos de 0.1 millones de espermatozoides/mL (100000) inmóviles puede considerarse como criterio suficiente de eficacia terapéutica, y permite dar el alta al paciente.
La presencia de espermatozoides móviles, sea cual sea su cantidad o porcentaje, indica reintervención.
Determinados individuos pueden mantener durante largo tiempo (a veces más de 12 meses) un número considerable (nota tutor…se entiende superior a 100000) de espermatozoides inmóviles. En estos casos se ha propuesto hacer un seguimiento más prolongado, e informar adecuadamente al paciente de su situación antes de darle el alta. Las propuestas más recientes proponen algoritmos simplificados , de modo que después de un máximo de dos seminogramas se decide o bien el alta definitiva, o bien la reintervención.
(Nota tutor…se supone que el documento final recogerá estos algoritmos)
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Nuria Almun… – martes, 23 de diciembre de 2014, 10:47
Una vez acabado el curso y repasando todo bien, quiero agradeceros el currazo que os habéis pegado con este tema a cuántos habéis participado de esta discusión. Gracias.
Un saludo.
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Tutor CEIFER… – lunes, 29 de diciembre de 2014, 09:28
Muchas gracias Nuria por tus palabras, nos alegra saber que te ha gustado el curso y sobretodo que te resulte útil.
Saludos
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Evelin Marga… – domingo, 13 de marzo de 2016, 04:13
Hola…, aunque este fue un debate hecho hace 5 años atrás, en donde existían dudas en relación al tratamiento de muestras de pacientes vasectomizados… lograron aclarar muchas sin estar alejados de la realidad, orientados por la poca información del momento y que actualmente, a mi también, me ha servido. Buscando, sin profundizar, publicaciones actuales, relacionadas al tema de discusión, encontré tres abstract:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23098786
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23917167
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25559727
En ellos se evalúa el impacto de la Guía 2012 de la Asociación Americana de Urología (AUA) para intervenciones de vasectomía en donde concluyen que la inclusión del criterio de:
100.000 o menos espermatozoides/ml inmóviles como una definición de éxito de vasectomía, ha permitido disminuir, potencialmente, el número de repeticiones de pruebas de laboratorio y repeticiones de la vasectomía, disminuyendo, igualmente, los costos e incrementando rápidamente la alta del paciente y detención del uso de anticonceptivos. Así que, nosotros a nivel de laboratorio tenemos que procesar estas muestras, así como nos los aclaran en este curso y por recomendación de la OMS (sin centrifugar la muestra, evaluar un vol de 40 ul con cubre de 24×50 mm para observar un total de 1200 campos y contar de acuerdo a las dos opciones que se nos da, Neubauer o fluorescencia), para ajustarnos a este criterio de la AUA:…Patients may stop using other methods of contraception when one uncentrifuged fresh semen specimen shows azoospermia or ≤ 100,000 non-motile sperm/mL…(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23098786).
Espero que lo que esté diciendo sea correcto.
Re: Análisis de semen postvasectomía
de Tutor CEIFER… – miércoles, 16 de marzo de 2016, 09:15
Muchas gracias Evelin por tus aportaciones. Sin duda contribuyen a elevar el nivel del curso y el compartir esta información con todos ayuda a enriquecer los conocimientos científicos de los participantes… e incluso tutores
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